PURECLTM HRP Substrate - Western-Blotting für Fortgeschrittene
Sensitivität gehört zu den am häufigsten beworbenen Eigenschaften von Chemilumineszenz-Substraten. Traditionell gilt ein Substrat als sensitiver, wenn es kürzere Messzeiten ermöglicht, bzw. in vorgegebener Zeit zu einem stärkeren Signal führt. Gemäß dieser Logik gilt: ein schnelleres Substrat kann automatisch schwächere Signale besser visualisieren.
Das Problem ist: tatsächlich wird hier Sensitivität mit Reaktivität verwechselt.
Um ein spezifisches Antigen (Protein) in geringer Konzentration detektieren zu können, ist es zwingend erforderlich, daß die Entstehung von Hintergrund im Experiment so weit wie möglich vermieden wird. Einige der vermeintlich sensitivsten (respektive reaktivsten) Substrate im Markt sind jedoch bekannt für die von ihnen geförderte, unerwünschte Hintergrundentwicklung. Umgekehrt sind eher hintergrundneutrale Substrate häufig nicht sehr sensitiv.
Sensitivität und Spezifität sind demnach zwei Seiten einer Medaille.
In Chemilumineszenz Western-Blots sind zahlreiche Faktoren für die Entstehung von Hintergrund verantwortlich. Darunter z.B. die Affinität des Antikörpers, die Effizienz des Blocking-Prozesses oder die Qualität des Messgerätes - um nur einige zu nennen. Bei der Wahl des Substrates wird dessen eigener Einfluss auf die Hintergrundentstehung jedoch häufig unterschätzt.
Genau an dieser Stelle setzen unsere PURECLTM Substrate an.
Sie wurden auf FUSION Imagern unter besonderer Berücksichtigung von Hintergrundneutralität optimiert. Ein Kernaspekt der FUSION Technologie ist die besonders rauscharme Messung.
Beide Substrate eignen sich deshalb für die sensitive Detektion von Western- oder Dot-Blot, sind aber nicht beschränkt auf FUSION Imager.
PURECLTM Ultra HRP Substrat ist extrem reaktiv und ermöglicht sehr kurze Prozesszeiten bei gleichzeitig höchster Sensitivität. Es wurde ursprünglich für das verkürzte Protokoll des PURITYTM HRP Detection Systems entwickelt (Western-Blot 2.0) eignet sich aber auch für das klassische sequenzielle Verfahren.
PURECLTM Dura HRP Substrat ist etwas weniger reaktiv, verfügt dafür über eine Signaldauer von bis zu mehreren Stunden. Aufgrund seiner enormen experimentellen Robustheit eignet sich PURECL Dura für ein sehr breites Spektrum unterschiedlicher Anwendungen:
Von den ersten Gehversuchen mit neuen Antikörpern bis zu den niedrig exprimierten Phosphoproteinen. Selbst das Hochdurchsatz-Labor, das aus ökonomischen Gründen Substrat zuweilen mehrfach verwendet, schätzt PURECL Dura als perfekten Allrounder.